Kit de PCR en temps real de Monkeypox Virus
Detalls del producte
Ús previst
S'utilitza per a la detecció del virus Monkeypox en mostres de sèrum humà o exsudat de lesions mitjançant sistemes de PCR en temps real.
Principi de prova
Aquest producte és un sistema d'assaig de PCR en temps real Taqman® basat en sonda fluorescent.Els cebadors i sondes específics estan dissenyats per a la detecció del gen F3L del virus Monkeypox.El control intern dirigit al gen conservat humà supervisa la recollida de mostres, la manipulació de mostres i el procés de PCR en temps real per evitar resultats falsos negatius.El kit és un sistema liofilitzat totalment premescla, que inclou materials necessaris per a la detecció del virus Monkeypox: enzim d'amplificació d'àcid nucleic, enzim UDG, tampó de reacció, cebador específic i sonda.
Continguts principals
Els components proporcionats es mostren a la taula.
| Components | paquet | Ingredient |
| Virus de la verola del micoPremescla liofilitzada | Tubs de PCR de 8 tires× 6 bosses | Primers, sondes, mescla dNTP/dUTP, Mg2+, ADN polimerasa Taq, enzim UDG |
| Control positiu MPV | Tub de 400 μL×1 | Seqüències d'ADN que contenen el gen Target |
| Control negatiu MPV | Tub de 400 μL×1 | Seqüències d'ADN que contenen un segment de gen humà |
| Solució de dissolució | 1 mL × 1 tub | Estabilitzador |
| Certificat de conformitat | 1 peça | / |
Flux d'operació
1. MostraCol · lecció:La mostra s'ha de recollir en tubs estèrils d'acord amb això
amb especificacions tècniques estàndard.
2. Preparació de reactius (Àrea de preparació de reactius)
Traieu els components del kit, equilibreu-los a temperatura ambient per utilitzar-los en espera.
3. Processament de mostres (àrea de processament de mostres)
3.1 Extracció d'àcids nucleics
Es recomana prendre mostres líquides de 200 μL, control positiu i control negatiu per a l'extracció d'àcids nucleics, d'acord amb els requisits i procediments corresponents dels kits d'extracció d'ADN viral.
3.2 Dissolució de pols liofilitzada i addició de plantilla
Prepareu la premescla liofilitzada Monkeypox Virus segons el nombre de mostres.Una mostra necessita un tub de PCR que contingui pols premescla liofilitzada.El control negatiu i el control positiu s'han de tractar com dues mostres.
(1) Afegiu 15 μL de solució de dissolució a cada tub de PCR que contingui una mescla liofilitzada i, a continuació, afegiu mostres extretes de 5 μl/control negatiu/control positiu a cada tub de PCR respectivament.
(2) Cobriu els tubs de PCR amb força, feu lliscar els tubs de PCR a mà fins que la pols liofilitzada es dissol i es barregi completament, recolliu el líquid al fons dels tubs de PCR mitjançant una centrifugació instantània a baixa velocitat.
(3) Si utilitzeu un instrument comú de PCR en temps real per a la detecció, transferiu directament els tubs de PCR a l'àrea d'amplificació;Si utilitzeu BTK-8 per a la detecció, cal que feu les operacions següents: transferiu 10 μL de líquid del tub de PCR al pou de xip de reacció de BTK-8.Un tub de PCR correspon a un pou del xip.Durant l'operació de pipeteig, assegureu-vos que la pipeta estigui a 90 graus vertical.Les puntes de la pipeta amb barrera d'aerosol s'han de col·locar al centre del pou amb una força moderada i deixar d'empènyer la pipeta quan arribi a la primera marxa (per evitar bombolles).Després d'omplir els pous, traieu una membrana de xip de reacció per cobrir tots els pous i després el xip es transfereix a l'àrea de detecció d'amplificació.
4. Amplificació per PCR (àrea de detecció)
4.1 Col·loqueu els tubs de PCR/xip de reacció al dipòsit de reacció i poseu els noms de cada pou de reacció en l'ordre corresponent.
4.2 Configuració de la fluorescència de detecció: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Control intern (CY5).
4.3 Executeu el següent protocol de ciclisme
Protocol d'ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Passos | Temperatura | Temps | Cicles | |
| 1 | Pre-desnaturalització | 95℃ | 2 minuts | 1 |
| 2 | Desnaturalització | 95℃ | 10 s | 45 |
| Recuit, extensió, adquisició de fluorescència | 60℃ | 30 s | ||
Protocol de BTK-8:
| Passos | Temperatura | Temps | Cicles | |
| 1 | Pre-desnaturalització | 95℃ | 2 minuts | 1 |
| 2 | Desnaturalització | 95℃ | 5 s | 45 |
| Recuit, extensió, adquisició de fluorescència | 60℃ | 14 s | ||
5. Anàlisi de resultats (consulteu el manual d'usuari de l'instrument)
Després de la reacció, els resultats es desaran automàticament.Feu clic a "Analitzar" per analitzar i l'instrument interpretarà automàticament els valors Ct de cada mostra a la columna de resultats.Els resultats del control negatiu i positiu s'ajustaran al següent "6. Control de qualitat".
6. Control de qualitat
6.1 Control negatiu: No Ct o Ct>40 al canal FAM, Ct≤40 al canal CY5 amb corba d'amplificació normal.
6.2 Control positiu: Ct≤35 al canal FAM amb corba d'amplificació normal, Ct≤40 al canal CY5 amb corba d'amplificació normal.
6.3 El resultat és vàlid si es compleixen tots els criteris anteriors.En cas contrari, el resultat no és vàlid.
Interpretació de resultats
Els resultats següents són possibles:
| Valor Ct del canal FAM | Valor Ct del canal CY5 | Interpretació | |
| 1# | Sense Ct o Ct>40 | ≤40 | Virus de la verola del mico negatiu |
| 2# | ≤40 | Qualsevol resultat | Virus de la verola del mico positiu |
| 3# | 40~45 | ≤40 | Tornar a provar;si encara és 40~45, informa com a 1# |
| 4# | Sense Ct o Ct>40 | Sense Ct o Ct>40 | Invàlid |
NOTA: Si es produeix un resultat no vàlid, la mostra s'ha de recollir i provar de nou.
Informació de la comanda
| nom del producte | Gat.No | Mida | Exemplar | Vida útil | Trans.& Sto.Temp. |
| Kit de PCR en temps real de Monkeypox Virus | B001P-01 | 48 proves/kit | Sèrum/ Exsudat de lesió | 12 mesos | -25~-15℃ |
